El coronavirus de la síndrome de diarrea aguda porcina (SADS-CoV) és un coronavirus patògen entèric porcí recentment descobert que pot causar diarrea aquosa en garrins nounats i causar pèrdues econòmiques importants a la indústria porcina.En l'actualitat, no hi ha un mètode serològic adequat per avaluar l'eficàcia de la infecció i la vacuna SADS-CoV, per la qual cosa hi ha una necessitat urgent d'utilitzar un test immunosorbent lligat a enzims (ELISA) eficaç per compensar aquesta deficiència.Aquí, es va construir un plasmidi recombinant que expressava la proteïna SADS-CoV spike (S) fusionada amb el domini Fc IgG humà per produir baculovirus recombinant i expressat en cèl·lules HEK 293F.La proteïna S-Fc es purifica amb resina de proteïna G i conserva la reactivitat amb anticossos anti-Fc humà i anti-SADS-CoV.A continuació, es va utilitzar la proteïna S-Fc per desenvolupar ELISA indirecte (S-iELISA) i optimitzar les condicions de reacció de S-iELISA.Com a resultat, mitjançant l'anàlisi del valor OD450nm de 40 sèrums negatius SADS-CoV confirmats per assaig d'immunofluorescència (IFA) i Western blotting, es va determinar que el valor de tall era 0,3711.El coeficient de variació (CV) dels 6 sèrums positius SADS-CoV dins i entre les sèries de S-iELISA eren tots inferiors al 10%.La prova de reactivitat creuada va demostrar que S-iELISA no té reactivitat creuada amb altres sèrums de virus porcí.A més, segons la detecció de 111 mostres de sèrum clínic, la taxa de coincidència global d'IFA i S-iELISA va ser del 97,3%.La prova de neutralització del virus amb 7 valors de OD450nm diferents de sèrum va mostrar que el valor de OD450nm detectat per S-iELISA es va correlacionar positivament amb la prova de neutralització del virus.Finalment, es va realitzar S-iELISA en 300 mostres de sèrum de granja porcina.Els kits comercials d'altres enterovirus porcins van mostrar que les taxes positives d'IgG de SADS-CoV, TGEV, PDCoV i PEDV eren del 81, 7%, 54% i 65, 3%, respectivament., 6%, respectivament.Els resultats mostren que el S-iELISA és específic, sensible i reproduïble, i es pot utilitzar per detectar la infecció SADS-CoV a la indústria porcina.Aquest article està protegit per drets d'autor.tots els drets reservats.
Hora de publicació: 22-jun-2021